在细胞迁移实验中，目的细胞需要按照标准细胞培养方案在血清培养基中进行培养。为确保检测结果的准确性，应在前一天使用无血清培养基（0.2% BSA）对细胞进行预处理。在无血清条件下培养过夜后，首先吸出细胞培养基，并使用PBS进行冲洗。接下来，加入胰蛋白酶溶液，以启动细胞分离过程。细胞悬液随后转移至试管中，并以350×g的离心条件离心5分钟，之后将细胞重新放入预热的细胞培养基中。最后，将细胞悬浮液稀释至每毫升100,000个细胞的接种密度。

在实验的接收阶段，向每个接收板孔中添加200 μl的培养基，可以选择添加或不添加化学引诱剂（例如，不同浓度的FCS从0.25%到10%）。然后，向膜板各孔中加入50 μl上述制备的细胞悬液，接着将细胞培养板放置于37°C、5% CO2的培养箱中培养24小时。

在此后的步骤中，从接收板各孔中吸出细胞培养基，并向接收孔中加入150 μl无血清培养基以及8 μM（在DMSO中稀释）钙黄绿素AM。再将其在37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养45分钟。随后，均从膜板和接收板的每个孔中吸出细胞培养基，并用PBS进行冲洗。为了使膜下侧迁移的细胞开始脱离，向接收板中加入胰蛋白酶溶液，孵育10分钟，并轻轻摇动。

接着，将每孔180 μl的胰蛋白酶细胞悬浮液转移至黑色96孔微孔板的每一孔中，并在激发波长485 nm和发射波长520 nm的读板器中读取荧光信号。

在膜板各孔中吸出培养基后，使用预湿的棉签，顺时针和逆时针方向轻轻旋转，以去除膜上部未迁移的细胞。接下来，利用绿色通道中的荧光显微镜检测膜下侧迁移细胞的荧光信号。值得一提的是，ThinCert®96孔HTS小室因其独特的孔结构提供了高透明度，这一特点促进了活细胞观察，可以有效检查细胞形态、评估细胞的融合及进行污染监测。因此，每次实验均伴随着对细胞的连续显微镜监测。

体外细胞迁移实验在寻找更好的生物标志物、治疗靶点和药物，以干预肿瘤转移、血管生成及炎症性疾病等复杂现象中，发挥着不可或缺的作用。这些实验提供了一个可控的环境，用于测量细胞迁移及分析不同分子的影响，如生长因子和趋化因子，或是候选药物。在进行迁移实验时，正确选择孔径至关重要，孔径必须与所研究细胞的大小相适应，既需足够限制细胞被动移动，又需足够允许其主动迁移。

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