尊龙凯时为您提供完整的大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南，确保您的实验顺利进行。以下是详细的操作步骤和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代，传代后每2天换液。
备注：用无菌离心管收集培养基样本，以便进行对比培养。如效果不佳，建议使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，尽快将其培养至良好状态，并灌满完全培养液，封好瓶口是运输细胞的最佳方法。在对细胞瓶使用75%酒精消毒后，放入超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。可使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议不同倍数各拍一张，尤其是40x, 100x, 200x），前三天的照片将是重要的售后依据。若不提供照片则默认收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基，然后放入37℃、5% CO2培育；若细胞密度超过80%，则可以进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，然后转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代，同时补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%时，按步骤操作：

1. 弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置观察，当细胞回缩变圆后，迅速加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃, 5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，由于某些细胞贴壁不牢，可能出现脱落现象。若脱离较多，可参照以下方法处理：将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，随后再离心，弃去上清，并加入1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

对于细胞出现问题的处理条款包括：

1. 若因运输问题导致细胞损失、瓶体破损、培养液泄漏，尊龙凯时将负责重发。
2. 在收到产品48小时内如发现污染问题，请提供真实实验结果以便核实，核实后可重发。
3. 细胞复苏后若大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，商讨重发事宜。
4. 如客户因自身原因造成的细胞污染或操作不当，尊龙凯时不予重发。

请遵循以上操作规范，确保细胞培养成功。如有任何问题，请及时联系尊龙凯时，我们将提供全力支持。