### 概述

甘油是甘油三酯水解的产物，与游离脂肪酸相似，甘油的水平是甘油三酯水解反应的重要检测指标，且其检测过程更加简单高效。本试剂盒采用了优化流程，能够有效检测组织或细胞中的甘油含量，其线性范围为10-1200µmol/L。

### 检测原理

在ATP的存在下，甘油会被甘油激酶转化为3-磷酸甘油，接着通过甘油磷酸氧化酶的作用生成过氧化氢。在过氧化物酶的催化下，色度底物转换为苯kun亚胺，其光密度值与甘油浓度呈正相关。

### 适用范围

可用于检测组织及细胞中的甘油浓度，适合多个生物医学研究应用。

### 试剂盒组成

本试剂盒可进行105次微板检测或30次1ml比色杯检测，具体组成包括：

• 裂解液50ml
• R1试剂16ml
• R2试剂4ml
• 标准甘油品1ml（4mmol/L，4ºC保存有效期6个月）

### 所需设备

请准备酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长为550nm，如没有该波长，请优先选用570nm，次选530nm或490nm。

### 细胞与组织样品处理

对于细胞样品（包括分化的脂肪细胞），建议用消化和离心的方法收集细胞，或直接在培养皿中裂解。一般情况下，6孔板每孔需约2x10⁶个细胞，75cm²培养瓶需约1x10⁷个细胞。按照比例，每1~2x10⁶个细胞加0.1ml裂解液，震荡后静置10分钟。

对动物组织的处理要注意：需先将新鲜组织剪切并称重，再进行保存。组织在冷冻后再解冻、剪切和称重可能会造成测量误差。请用减量称重法计算组织重量（约100mg），并强烈建议以每1mg组织加10µl裂解液，以减少样品间蛋白和脂质含量的变异。使用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器碎裂组织，不推荐采用超声破碎，因为其可能无法完全和均匀破碎。

### 裂解液处理

将上清液转移至15ml离心管中，余下的裂解液可用于蛋白定量，或者在-20ºC冷藏。将样品加热至70ºC并保持10分钟以灭活脂肪酶，可能会出现絮状沉淀。接着在室温下以5000rpm离心5分钟，上层清液可以用于酶学测定。

### 工作溶液配制

按照4:1的比例，将4ml R1试剂与1ml R2试剂混合使用，混合后可立即使用或在4ºC下保存不超过1天，以避免变色。

### 标准品稀释

使用蒸馏水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品逐级稀释至1000、500、250、125、62.5、31.25和15.625µmol/L，并至少选取其中的4~6个管道进行检测，注意设置0浓度对照管。

### 甘油含量测定

待测样品体积为10µl，多加可能会抑制反应，反应在23ºC或25ºC下进行10分钟。反应平衡后，颜色会在60分钟内稳定。首先用蒸馏水和工作液的空白管调零，然后测定每个管的OD值，并绘制标准曲线以计算甘油浓度。

### 结果分析

根据每mg蛋白浓度或细胞数对甘油含量进行校正，确保结果准确。使用尊龙凯时品牌优质试剂盒，您可以获得可靠的实验结果和优良的用户体验。