在细胞培养过程中,了解培养条件对于获得良好的细胞生长状态至关重要。对于贴壁细胞来说,最佳气相是95%的空气和5%的二氧化碳,理想的培养温度为37℃。传代建议为1:2,传代后每两天要更换培养液。
在细胞收到后,请勿立即打开瓶盖,检查培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的一致,并确认瓶身无破损或漏液。如状态良好,使用显微镜观察细胞生长情况并拍照(建议40x, 100x, 200x各一张),前三天的照片作为售后依据。若未提供照片,则默认细胞状态良好。
关于细胞的处理,细胞生长至理想状态后,需灌满完全培养液并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后首先检查如前所述。
对于细胞的传代,按照以下步骤进行:抛弃培养上清,用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。然后,加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液,放置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态。如细胞已变圆并部分脱落,则添加5ml完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞以使其完全脱落,随后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。最后,依据需要按1:2的比例分瓶传代,补充新的完全培养基至每瓶5-8ml,并放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。
细胞冻存也是重要的一环。当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液并用PBS清洗。添加0.25%的胰蛋白酶消化液,轻轻吹打后,收集到含无血清冻存液的管中,然后放入-80℃冰箱进行储存,确保在搬入液氮罐前,需在-80℃存放24小时以上。
细胞复苏过程中,从液氮中取出细胞冻存管,迅速放入37℃水浴中解冻直至无结晶,之后用75%酒精消毒外壁,并重悬在含有完全培养基的离心管中,再次进行离心和重悬,最后接种至培养瓶中。
在细胞的运输和培养过程中,出现问题的情况包括细胞在运输过程中的损失、污染等。我们建议您在收到产品的48小时内提供实验证明,以便进行后续的产品替换。同时,对细胞的操作要严格遵循说明,避免人为因素造成的损耗。
选择尊龙凯时的细胞培养产品,不仅为您的实验提供可靠保障,更能保证细胞的高活性和稳定性,让您的研究尽快取得令人瞩目的成果。如您在使用过程中有任何疑问,请及时与我们联系,期待能为您提供更优质的服务与支持。